Celltechgen CTG-MGN4766说明书

Celltechgen CTG-MGN4766说明书

Screening Kit

• Model: CTG-MGN4766

细节：

- 筛选套件

货号：CTG-MGN4766

试剂盒组分：

2毫升 - 磁珠与单克隆抗体结合 - 。

200μl-单克隆抗体，R-PE共轭（用于检测）

描述

该试剂盒用于使用磁珠磁性标记来消耗 - ⁺细胞。细胞用 - 磁珠标记并施加到磁柱上，收集流过部分中的耗尽细胞用于进一步实验。筛选步骤可在细胞扩增后再次进行。

目标特征

符号： -

基因编号：729816

Uniprot条目：Q04683

蛋白质名称：CXC趋化因子受体5型（CXC-R5）（CXCR-5）（伯基特淋巴瘤受体1同源物）（CD抗原CD185）Mus musculus（Mouse）

目标功能

容量        

1 X 10 ^9个细胞

公式  

所有组分均以含有稳定剂和0.05％sodium azide的缓冲液供应。

存储和使用      

在2-8°C的温度下避光保存。不要冻结。到期日期显示在样品瓶标签上。该产品仅供研究使用，不适用于诊断程序。

一般议定书

提供筛选珠粒以用突变的细胞表面抗原分离靶细胞或用特异性抗原消耗非靶细胞。筛选程序通过用针对细胞表面抗原的单克隆抗体磁珠间接磁性标记细胞（突变或特异于非靶细胞）进行，然后通过柱分离标记的细胞和靶细胞。收集流出部分以进行进一步分析。

1.样品制备

• 当使用抗凝外周血或血沉棕黄层时，应通过密度梯度离心分离外周血单核细胞（PBMC）。
• 为了在密度梯度分离后除去血小板，将细胞沉淀重悬于缓冲液中，并在20℃下以200×g离心10-15分钟。小心吸出上清液。重复洗涤步骤。
• 使用组织或裂解的血液时，使用标准方法制备单细胞悬液。
• 死细胞可以非特异性结合磁珠。为了去除死细胞，我们建议使用密度梯度离心或死细胞去除试剂盒。
• 保持细胞冷却，并使用预先冷却的溶液。

2.磁性标签

• 以下给出的磁性标签卷多可达10个？总细胞。工作时少于10？细胞，使用与指示相同的体积。使用较高的细胞数时，相应地扩大所有试剂体积和总体积。
• 应滴定初级染料缀合的抗体以确定宜染色稀释度。染色不应该增加阴性群体的荧光强度。

1）     计算细胞数量。

2）     以300×g离心细胞悬浮液10分钟。*吸出上清液。

3）     每10 ^7个总细胞将细胞重悬于80μL缓冲液中。注意：等分适量的细胞用于抗体-R-PE标记和检测。

4）     每10小时加入20μL抗细胞表面抗原磁珠。总细胞。

5）充分混合，在2-8℃下孵育15分钟。

6）每10小时加入1-2 mL缓冲液洗涤细胞？将细胞以300×g离心10分钟。

7）*吸出上清液。

8）重新悬挂10？细胞在500μL缓冲液中。注意：对于更高的单元格数，请相应地扩大缓冲区容量。

9）继续磁分离。

3.筛选靶细胞

1）    将色谱柱放在合适的分离器的磁场中。

2）    用2 mL缓冲液冲洗制备色谱柱。

3）    将细胞悬浮液施加到柱上。

4）    收集未标记的细胞，其通过并用2×1mL缓冲液洗涤柱。一旦柱贮存器为空，则通过连续添加缓冲液来执行洗涤步骤。收集总排出物。其含有未标记的预富集浆细胞部分。

5）    通过以300×g离心10分钟收集流出级分中的靶细胞，小心吸出上清液。

6）    将未接触的细胞重悬于培养基或所需的缓冲液中用于进一步实验。

7）    等分适当量的细胞用于抗体-R-PE标记和检测是否有足够的细胞，否则，在细胞扩增后进行抗体-R-PE标记和检测。

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