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    neb P0704S说明书

     更新时间:2019-02-18 点击量:2913

    neb P0704S说明书

    PNGase F.

    目录 #

     

     P0704S

    • 浓度

       500,000单位/毫升

      尺寸

    •   P0704L  75,000个单位

      价格表

      $ 718.00

    PNGase F是从糖蛋白中去除几乎所有N-连接的寡糖的有效的酶促方法。PNGase F是酰胺酶,其在高甘露糖,杂合和复合寡糖的内部GlcNAc和天冬酰胺残基之间切割。

    • 通过SDS-PAGE和完整的ESI-MS测定,纯度≥95%
    • 非重组,没有可检测的内切糖苷酶F1,F2或F3污染
    • 储存在50%甘油中; 宜活动和稳定性长达24个月
    • 可在天然或变性条件下使用
    • 优化糖蛋白的去糖基化; 使N-聚糖核心寡糖保持完整,适合进一步分析

     

     

     

     

     
     

    肽 - N-糖苷酶F,也称为PNGase F,是一种酰胺酶,可裂解来自N-连接糖蛋白的高甘露糖,杂合寡糖和复合寡糖的内层GlcNAc和天冬酰胺残基(1)

    详细的特异性: 详细的特异性:

    当内部的GlcNAc残基与α1-3岩藻糖残基连接时,PNGase F不能从糖蛋白切割N-连接的聚糖。这种修饰常见于植物和一些昆虫糖蛋白中。

    产品来源

    PNGase F从脑膜炎黄杆菌Flavobacterium meningosepticum)(3)中纯化,不含蛋白酶和Endo F活性。

    提供的试剂

    本产品随附以下试剂:

     存储在(°C)浓度
    糖蛋白变性缓冲液-2010 X.
    NP-40-2010%
    GlycoBuffer 2-2010 X.

     

    应用功能

    • 糖蛋白分析
    • 从糖蛋白中去除高甘露糖,杂合和复杂的  N-聚糖
    • 无污染物(Endo F,蛋白酶等)

     

    单位定义

    一个单位定义为在37℃下在10μl的总反应体积中在1小时内从10μg变性的RNase B中除去> 95%的碳水化合物所需的酶量。

    单位定义测定:
    将10μgRNaseB用1X糖蛋白变性缓冲液(0.5%SDS,40mM DTT)在100℃变性10分钟。加入NP-40和GlycoBuffer 2后,加入两倍稀释的PNGase F,将反应混合物在37℃下温育1小时。通过SDS-PAGE显现反应产物的分离。

    1X糖蛋白变性缓冲液
    0.5%SDS 
    40 mM DTT 

    1X NP-40
    1%NP-40,MilliQ-H 2 O

    反应条件

    1X GlycoBuffer 2 
    在37°C孵育

    1X GlycoBuffer 2 
    50 mM磷酸钠
    (pH值@ 25°C)

     

    贮存温度

    -20℃下

    储藏条件

    在 25℃下,20mM Tris-HCl 
    50mM NaCl 
    5mM EDTA 
    50%甘油
    pH 7.5

    热灭活

    75°C,10分钟

    分子量

    表观:36000道尔顿

    1. 由于SDS抑制PNGase F活性,因此必须使NP-40存在于反应混合物中。为什么这种非离子型去污剂抵消SDS抑制作用目前尚不清楚。
    2. 为了使天然糖蛋白去糖基化,可能需要更长的孵育时间以及更多的酶。
    3. PNGase F不会切割  含有核心α1-3岩藻糖的N-连接聚糖。
    4. 典型反应条件:请参阅协议

     

     

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