abbexa abx150357说明书
脂多糖ELISA试剂盒
目录号：abx150357
尺寸：96T
范围：12.35 ng/ml-1000 ng/ml
灵敏度：<5.15 ng/ml
储存：将标准品、检测试剂A、检测试剂B和96孔板储存在-20°C下，以及其他试剂盒组件
在4°C时。
用途：用于血清、血浆、组织匀浆、细胞裂解液、细胞培养上清液和
其他生物液体。
简介：脂多糖（Lipopolysaccharides，LPS）又称为脂多糖和内毒素，是由脂类和内毒素组成的大分子
由O抗原、外核和内核组成的多糖，由共价键连接；它们存在于
革兰氏阴性菌。
分析原理
该试剂盒基于竞争性结合酶联免疫吸附分析技术。在96孔板上预先包被一种针对脂多糖的抗体。在生物素标记的脂多糖和未标记的脂多糖之间启动竞争性抑制反应
脂多糖特异性的预涂抗体。洗去未结合的结合物后，与辣根过氧化物酶结合的亲和素
加入每一个微孔板并孵育。加入TMB基质溶液后，只有含有LPS的孔才会产生蓝色
加入酸性停止液后变成黄色的产品?；粕那慷扔?br />脂多糖在板上的结合量。用分光光度法在450 nm处用微孔板阅读器测量O.D.吸光度，以及
然后计算LPS的浓度。
套件组件
1。一块预涂96孔微孔板（12×8孔条）
2。标准：2管
三。标准稀释液：20毫升
四。冲洗缓冲液（30倍）：20毫升。稀释度：1:30
5个。稀释剂A:12毫升
6。稀释剂B:12毫升
7号。停止溶液：6毫升
8个。TMB基质：9ml
9号。检测试剂A:1管
10个。检测试剂B（100X）：120μl
11号。封板机：4台
12岁。试剂稀释液：300μl
需要但未提供的材料
1。37°C培养箱
2。微板阅读器（波长：450nm）
三。多通道和单通道移液管及无菌移液管
四。喷射瓶或自动微孔板清洗机
5个。ELISA摇床
6。制备标准稀释液或样品稀释液的试管
7号。去离子水或蒸馏水
8个。吸水滤纸
9号。100毫升和1升量筒
协议
A、 样品和试剂的制备
一。样品
收集后立即分离测试样品，立即分析或在4°C下保存5天。否则，应在-20°C下保存一个月，或在-80°C下保存两个月，以避免生物活性丧失。避免多次冻融循环。
•血清：应将样本收集到血清分离管中。在4°C或室温下，使试管在垂直位置静置一整夜，使血清凝固60分钟。以约1000×g离心20分钟。
立即或等分分析血清，并储存在-20°C或-80°C下。
•血浆：使用肝素或EDTA作为抗凝剂收集血浆。收集后30分钟内，在1000×g下离心15分钟。立即测定或等分并储存在-20°C或-80°C下。避免溶血和高胆固醇样品。
•组织匀浆：组织匀浆的制备将根据组织类型而有所不同——这只是一个例子。
用冰冷的PBS冲洗组织，去除多余的血液。均化前称重。在PBS中，用组织匀浆器将组织细粉碎并匀浆，然后对细胞悬浮液进行超声处理。将匀浆在5000×g离心5min，收集上清液。立即测定或等分并储存在-20°C下。
•细胞裂解物：用胰蛋白酶分离粘附细胞，离心收集并去除上清液。在冷冻PBS中清洗细胞三次，然后在PBS中重新悬浮细胞。用超声波裂解细胞4次或在-20℃冷冻，并解冻至室温3次。在1500×g下，在2-8°C下离心10分钟，以去除细胞碎片。收集上清液并立即化验。
•细胞培养上清：以约1000×g离心20分钟以除去沉淀剂。立即分析或等分并储存在-20°C或-80°C下。
•其他生物流体：以约1000×g离心20分钟以去除沉淀剂。立即分析或等分并储存在-20°C或-80°C下。
注：
？缓慢将样品送至室温。样品溶血会影响结果。不应使用溶血标本。
？样品必须稀释，使预期浓度在试剂盒的范围内。样品应在0.01 mol/L PBS（PH=7.0-7.2）中稀释。
？如果本手册的应用中没有说明样品，则需要进行初步试验，以确定试剂盒的有效性。
？建议使用新鲜样品或近获得的样品，以防止可能导致错误结果的蛋白质降解和变性。为了更好的检测，强烈建议使用血清而不是血浆。
»采血时始终使用非致热、无内毒素的试管。
2。洗涤缓冲液
用蒸馏水将浓洗缓冲液稀释30倍（1/30）（即将20毫升浓洗缓冲液加入580毫升蒸馏水中）。
三。标准
将样品和所有组件置于室温下。用0.5ml标准稀释液（室温下保存10min）配制标准品，制成1000ng/ml标准溶液。在进行连续稀释之前，让重组标准品静置10分钟，轻轻搅拌；避免起泡或气泡。用333.33 ng/ml、111.11 ng/ml、37.04 ng/ml、12.35 ng/ml标记4支试管。将0.6 ml标准稀释剂缓冲液等分到每支试管中。将0.3毫升1000 ng/ml标准溶液加入第1管中，并充分混合。将0.3毫升从一管转移到第二管，充分混合，以此类推。
