CCK-8细胞活性检测试剂盒说明书

CCK-8细胞活性检测试剂盒说明书

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产品详情

  产品描述

Cell Counting Kit-8 (CCK-8) 细胞活性检测试剂盒是一种广泛应用于细胞增殖和细胞毒性相关实验的快速、高灵敏度检测试剂盒。

CCK-8 的主要成分为水溶性四唑盐[Water Soluble Tetrazolium-8] (2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐)，Water Soluble Tetrazolium-8是一种类似于MTT 的化合物，在电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色的水溶性的甲臜（Formazan，参考图1)。

Water Soluble Tetrazolium-8被细胞内脱氢酶生物还原后生成的甲臜能够直接溶解在培养基中?；钕赴氖吭蕉?，则颜色越深。对于同样的细胞，颜色的深浅和细胞数目呈线性关系。

图1. Water Soluble Tetrazolium-8分子结构及CCK-8检测原理

产品特点

1.   MTT 法生成的甲臜不是水溶性的，需要使用DMSO 等有机溶剂溶解；而CCK-8 产生的甲臜是水溶性的，省去了溶解步骤，因此减少了该操作步骤带来的实验误差。

2.   由于CCK-8 产生的甲臜是水溶性的，无需吸掉培养基后，再用DMSO 等有机溶剂溶解，非常适合用于悬浮细胞的活性测定。

3.   与MTT 方法相比，CCK-8 法线性范围更宽，灵敏度更高。

4.    CCK-8 法对细胞无毒性，可以多次测定，选取最佳测定时间。

5.    CCK-8 法无需配制，即开即用。

6.   CCK-8 法适合大规模、高通量的样品检测。

使用方法

使用方法

1.   在96 孔板中配制100 μL 的细胞悬液。将培养板在培养箱预培养24 小时（在37℃，5% CO₂的条件下）。

2.    向培养板加入10 μL 的待测药物进行处理。

3.  根据实验需要，将培养板在培养箱孵育一段时间 （例如：6, 12，24 或48 小时）。

注：如果不进行药物处理而直接测定细胞的活性，则不需要2-3 步骤，直接从第4 步操作。

4.    向每孔加入10 μL CCK-8 溶液（注意不要在孔中生成气泡，它们会影响O.D 值的读数）。

5.   将培养板在培养箱内孵育2-4 小时。

6.   用酶标仪测定在450 nm 处的吸光度。

7.   如果暂时不测定OD 值，可 以向每孔中加入10 μL 1% SDS（w/v） 溶液或者 0.1 M HCl 溶液，并盖上培养板盖子，在室温条件下避光保存。24 小时内吸光度不会发生变化。

实验案例分析

图2. 本实验结果证明：上海起发CCK8与同仁CCK8的测试效果几乎相同。

注意事项

1.     由于96 孔板周围一圈最容易蒸发，周围一圈建议不用，改加PBS或水。

2.    CCK-8 检测细胞活性的原理是通过检测活细胞脱氢酶催化的反应。如果待测体系中存在还原剂（例如一些抗氧化剂），可能会干扰检测结果，需设法去除其影响。

3.  当使用标准96 孔板时，贴壁细胞的最小接种量至少为1,000 个/孔 (100 μL 培养基)。检测白细胞时的灵敏度相对较低，因此推荐接种量不低于2,500 个/孔 (100 μL培养基)，且加入CCK-8后孵育的时间长一些。

4.   如果细胞培养时间较长，培养基颜色发生变化，应洗涤细胞更换培养基后再加CCK-8 检测。

5.   酚红和血清对本试剂盒的测定无明显影响。培养基中酚红的吸光度可以在计算时，通过扣除只含有培养基的对照孔中本底的吸光度而消除，因此不会对检测结果造成影响。